پاورپوينت فيزيک دوازدهم

کلونينگ مولکولي

مقاله اصلي: کلونينگ مولکولي

تصوير انتقال

يکي از بنيادين ترين تکنيک هاي پاورپوينت فيزيک دوازدهم مولکولي براي بررسي عملکرد پروتئين ، کلونينگ مولکولي است. در اين تکنيک ، کدگذاري DNA براي پروتئين مورد علاقه با به کارگيري بازتاب زنجيره اي پليمراز (PCR) و / يا آنزيم هاي اندک کننده در پلاسميد (بردار بيان) کلون مي شود. يک وکتور 3 ويژگي جدا دارد: منشاء تکثير ، يک سايت کلونينگ چندگانه (MCS) و يک نشانگر انتخابي معمولاً پايداري آنتي بيوتيکي. مناطق بالادست از سايت کلونينگ متعدد مناطق پروموتور و سايت آغاز رونويسي هستند که بيان ژن کلون شده را تنظيم مي کنند. اين پلاسميد را مي تاب در سلول هاي باکتريايي يا حيواني وارد کرد. شناسايي DNA در سلولهاي باکتريايي مي تواند از راه جذب DNA DNA ، ژوگه از طريق تماس سلول يا سلول از راه بردار ويروسي اتمام شود. معرفي DNA به سلولهاي يوکاريوتي ، مثل سلولهاي حيواني ، به وسيله فيزيکي يا کيميايي ، ترانسفکشن ناميده مي شود. چندين طريق گوناگون ترانسفکشن در دسترس هستند ، از جمله ترانسفکشن کلسيم فسفات ، الکتروپوراسيون ، ميکرواينجکشن و انتقال ليپوزوم. پلاسميد شدني است در ژنوم يکپارچه شود ، برآيند اينکه يک ترانسفکشن استوار باشد ، يا شدني است از ژنوم مستقل بماند ، به اسم ترانسفکشن گذرا. [12]

کدگذاري DNA براي پروتئين مورد علاقه الان در تو يک سلول قرار دارد و پروتئين هم اکنون مي تواند بيان شود. گونه ها سيستم ها ، از آنگونه پروموتورهاي القايي و فاکتورهاي ويژه سيگنال دهي سلول ، در ذکر پروتئين علاقه در سطوح بالا در دسترس هستند. مقادير زيادي پروتئين از سلول باکتري يا يوکاريوتيک بيرون مي شود. پروتئين را مي نا براي فعاليت آنزيمي تحت شرايط مختلف تست کرد ، پروتئين شدني است متبلور شود بنابراين مي تاب ساختار سوم آن را باره مطالعه قرار داد ، يا در صنعت داروسازي مي توان فعاليت داروهاي جديد در برابر پروتئين را مورد مطالعه قرار داد. [14]

واکنش زنجيره اي پليمراز

مقاله اصلي: واکنش رشته اي پليمراز

واکنش سلسله اي پليمراز (PCR) يک تکنيک زياد متنوع براي کپي کردن DNA است. به طور خلاصه ، PCR دستور مي دهد لغايت يک دنباله DNA خاص به طريق هاي از قبل تعيين شده کپي يا اصلاح شود. اين واکنش بسيار نيرومند است و در شرايط عالي مي تواند يک مولکول DNA را تقويت کند الي در کمتر از دو ساعت به 1.07 ميليارد مولکول تبديل شود. از روش PCR مي نا براي شناسايي سايت هاي آنزيمي اندک کننده به انتهاي مولکول هاي DNA يا جهش پايه هاي ويژه DNA بهره‌گيري کرد ، دومي روشي است که به عنوان جهش زايي سايت به کار مي رود. PCR در ضمن مي تواند براي تعيين اينکه آيا يک تکه DNA خاص در يک کتابخانه cDNA يافت مي شود ، باره استفاده پيمان گيرد. PCR دگرگوني ها زيادي دارد ، مانند رونويسي مع PCR (RT-PCR) براي تقويت RNA ، و اخيراً ، PCR کمي که امکان اندازه گيري کمي از مولکول هاي DNA يا RNA را فراهم مي کند. [15] [16]

الکتروفورز ژل

مقاله اصلي: الکتروفورز ژل

دو درصد ژل آگارز در بافر بورات در يک سيني ژل ريخته مي شود.

الکتروفورز ژل يگانه از ابزارهاي اصلي پاورپوينت فيزيک دوازدهممولکولي است. ريشه-بن-بيخ اساسي اين است که DNA ، RNA و پروتئين ها با استفاده از يک ميدان الکتريکي و اندازه مي توانند از هم جدا شوند. در الکتروفورز ژل آگارز ، DNA و RNA مي توانند براساس اندازه از راه اجراي DNA از طريق ژل آگارز با بار الکتريکي از هم جدا شوند. پروتئين ها را مي طاقت بر بنياد اندازه با استفاده از ژل SDS-PAGE يا بر پاي بست، اندازه و بار الکتريکي آنها با استفاده از آنچه به عنوان الکتروفورز ژل 2D شناخته مي شود ، از هم جدا کرد. [17]

پاورپوينت فيزيک دوازدهم

اصطلاحات وسترن بلات ، غربي و شرقي از آنچه در نخست يک مزاح زيست شناسي مولکولي بود که با اصطلاح بلاتينگ جنوبي بازي مي کرد ، حاصل مي شود ، بعد از تکنيک توصيف شده توسط ادوين جنوبي براي هيبريداسيون DNA blotted. پاتريشيا توماس ، گسترش دهنده تقسيم RNA که در آن سررسيد به عنوان تکه شمالي سرشناس شد ، واقعاً از اين اصطلاح کاربرد نکرد. [18]

بلات جنوبي

مقاله اصلي: بلات جنوبي

South Blot روشي که بعد از مخترع آن ، پاورپوينت فيزيک دوازدهم نامگذاري شده است ، روشي براي رسيدگي هستي يک توالي DNA خاص در يک مثال DNA است. نمونه هاي DNA قبل يا بعد از هضم آنزيم محدود کننده (اندونوکلئاز اندک کننده) بدست الکتروفورز ژل از هم جدا مي شوند و با به کارگيري عمل مويرگي به يک غشاي منتقل مي شوند. غشاها سپس در معرض يک پروب DNA برچسب خورده قرار مي گيرند که يک توالي پايه مکمل به دنباله روي DNA باره علاقه دارد. [19] لکه هاي جنوبي به انگيزه گنجايش ديگر تکنيک ها ، مشابه PCR ، براي تشخيص توالي DNA ويژه از نمونه هاي DNA ، در علوم آزمايشگاهي کمتر مورد کاربرد قرار مي گيرد. اين لکه ها هنوز هم براي برخي از برنامه ها مورد کاربرد پيمان مي گيرد ، همانند اندازه گيري شمار کپي ژن هاي تراريخته در موش هاي تراريخته يا مهندسي ساخت ژن هاي سلول هاي اساسي جنيني.